支原體清除劑的一般使用

支原體去除劑在細胞培養(yǎng)中的應用雖能有效清除污染，但其對細胞本身的影響仍需謹慎評估。實驗數(shù)據(jù)顯示，部分抗生素類去除劑會干擾細胞代謝周期——例如濃度超過5μg/mL的喹諾酮類藥物可使HEK293細胞的增殖速率降低37%，這種抑制作用往往在停藥后仍持續(xù)2-3代。更值得關(guān)注的是，某些含表面活性劑的化學清除劑會導致細胞膜表面蛋白的暫時性脫落，流式細胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)CD44和整合素β1的表達量在處理后24小時內(nèi)下降約40%。

支原體(mycoplasma)，又稱霉形體，為目前發(fā)現(xiàn)的最小的最簡單的原核生

支原體清除試劑(Mycoplasma Removal Agent，MRA)是一種用于抑制和清除在培養(yǎng)細胞過程中廣泛存在的支原體污染的試劑，亦可稱為支原體去除劑。MRA既可以用于去除細胞中已有的支原體污染，也可以用于防止支原體污染。MRA的具體工作濃度因支原體的種類不同而有所不同，在實際清除或防止支原體污染時，可使用試劑供應商推薦的工作濃度，也可以自行測試獲取適當?shù)墓ぷ鳚舛取Ｔ趯嶒炃埃瑧鶕?jù)不同的實驗要求、細胞類型等進行優(yōu)化，確定**條件。

支原體清除劑的一般使用方法：

1、將推薦濃度的支原體清除劑添加到被支原體污染的細胞培養(yǎng)物中，并至少培養(yǎng)1周；

2、若推薦濃度對去除支原體無效，可嘗試提高工作濃度；

3、對于培養(yǎng)基更換或培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移(傳代)，使用含有相同濃度支原體清除劑的培養(yǎng)基；

4、在不使用支原體清除劑的情況下轉(zhuǎn)移細胞培養(yǎng)物數(shù)次，并確認污染支原體沒有再生。

為平衡清除效率與細胞活性，建議采用梯度處理策略。首日使用治療濃度（如2μg/mL普那霉素）沖擊處理6小時，后續(xù)3天改用0.5μg/mL維持濃度。這種方案在保持85%以上清除率的同時，能將細胞凋亡率控制在15%以內(nèi)。值得注意的是，原代細胞對去除劑更為敏感，在處理人間充質(zhì)干細胞時，建議將暴露時間縮短至常規(guī)細胞系的1/3。